东亚钳蝎Na+通道毒素BmkNaTx12的基因克隆与重组表达

• 作者: 卢悟广 夏扬 曹鹏 胡玲玲 陈姣 霍介格 颜怀江
• 来源期刊: 中国药科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 东亚钳蝎 蝎毒素 基因克隆 表达 Na+通道
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 220-226
• 页数: 7页
• 分类号: R931.74|R34|R966
• 字数: 5203字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11665/j.issn.1000-5048.20170214

摘要

利用野生东亚钳蝎毒腺构建cDNA文库,并通过序列比对确定了一条全新的Na+通道长链毒素BmkNaTx12并克隆出其全长cDNA序列.序列比对显示BmkNaTx12的序列与墨西哥毒蝎的β-毒素Cn12具有较高的结构相似性,通过同源模型构建并选取打分最高的模型得到BmkNaTx12的预测结构,经分子动力学优化发现蛋白结构在300 ns趋于稳定,而蛋白20、35、52个氨基酸处的波动很可能由于这些氨基酸所处位置在loop区域导致.进一步构建了BmkNaTx12-Fc融合蛋白重组表达系统,通过Western blot技术确定重组蛋白最佳表达时间,并在HEK293细胞中成功表达出BmkNaTx1 2-Fc融合蛋白.经蛋白A亲和色谱纯化后获得的重组融合蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳及高效液相鉴定后纯度高达95％.此外,全细胞膜片钳实验结果显示:BmkNaTx12-Fc在1μmol/L浓度下能增大20％ Nav1.7峰电流.研究结果为后续的生物学功能研究奠定了理论基础.