三种方法提取血清miRNA效果的比较

• 作者: 刘敏 张雅芳 赵强元 郭建巍 陈昌国 陈秋圆 马志家
• 来源期刊: 检验医学与临床
• 关键词: miRNA Let-7a-5p Cel-miR-39-3p 提取
• 年，卷（期）: 2015,（20）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 2976-2978
• 页数: 3页
• 字数: 2272字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-9455.2015.20.003

摘要

目的：比较Trizol法、蛋白酶K消化＋ Trizol法及沉淀裂解法提取血清miRNA的效果。方法分别选取2例健康人、2例肺炎患者和2例肺癌患者血清，以Let‐7a‐5p作为目标mRNA ，线虫Cel‐miR‐39‐3p作为内参，分别采用Trizol法、蛋白酶K消化＋ Trizol法及沉淀裂解法提取血清miRNA ，以Let‐7a‐5p及Cel‐miR‐39‐3p特异性引物进行反转录PCR ，以反转录PCR产物为模板运用SYBGreen Ⅰ法进行荧光定量PCR检测。结果 T rizol法与蛋白酶K消化＋ Trizol法均能有效提取到血清miRNA ，而沉淀裂解法由于没有对血浆中的RNA进行富集故提取效果不佳。T rizol法提取较蛋白酶K消化＋ T rizol法相比，可以减少蛋白酶K的消化时间且提取效果更好，并且血清与Trizol试剂的体积比为200∶600时效果相对较好。三种方法检测Cel‐miR‐39‐3p的Ct值基本一致。Tr‐izol法和蛋白酶K消化＋ Trizol法在提取过程中加入的内参丢失较少。结论 Trizol法作为总RNA提取的手段适用于血清miRNA提取，通过调整血清与Trizol试剂的用量可使提取到的血清miRNA能够满足试验需要。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘敏	中国人民解放军海军总医院检验科	120	627	13.0	22.0
2	陈昌国	中国人民解放军海军总医院检验科	12	39	4.0	5.0
3	赵强元	中国人民解放军海军总医院检验科	24	69	4.0	6.0
4	郭建巍	中国人民解放军海军总医院检验科	15	35	4.0	5.0
5	张雅芳	中国人民解放军海军总医院检验科	8	33	2.0	5.0
6	马志家	中国人民解放军海军总医院检验科	4	9	2.0	3.0
7	陈秋圆	中国人民解放军海军总医院检验科	4	8	2.0	2.0