SYBR Green 实时荧光定量聚合酶链反应宽范围检测人GAPDH基因体系的建立

• 作者: 张影 徐颖华 李喆 辛晓芳
• 来源期刊: 国际检验医学杂志
• 关键词: 内参基因 3-磷酸甘油醛脱氢酶 荧光定量-聚合酶链反应 灵敏
• 年，卷（期）: 2015,（22）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 3229-3231
• 页数: 3页
• 字数: 3081字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4130.2015.22.004

摘要

目的：建立一种快速、灵敏的人3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）基因实时荧光定量-聚合酶链反应（RT-PCR）方法。方法根据GeneBank数据库中提供的人GAPDH基因（NC＿000012）mRNA序列，在其保守区域设计一对用于RT-PCR引物，通过优化反应体系和反应条件，成功建立了检测人GAPDH 基因的SYBR Green RT-PCR方法。结果实验结果表明，该检测方法检测人G A PD H基因的最低检测拷贝数可达到15 co pies／μL ，在一个较宽的浓度范围内（1．5×101～1．5×107）具有良好的线性关系（r＝0．992）。溶解曲线呈现了清晰的单一峰型，Tm值为（84．5±0．2）℃。结论该研究为人GAPDH基因作为内参基因进行人功能基因与病原基因表达的定量分析提供了一种更为快速、灵敏的方法。