构建大鼠白细胞介素1β基因shRNA腺病毒载体

• 作者: 刘艳芳 张宇 李航 赵晓龙 邓亚南 陈建平 韩磊 高文燕
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 实验动物 基因病毒载体及相关因子模型 神经病理性疼痛 白细胞介素1β 基因表达 RNA干扰 小干扰RNA 短发卡RNA 腺病毒载体 载体质粒 HEK293细胞 大鼠H9C2细胞 山西省自然科学基金
• 年，卷（期）: 2015,（18）
• 所属期刊栏目: 技术与方法 -- 基因病毒载体及相关因子与动物模型
• 页码范围: 2923-2927
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 字数: 5295字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.18.024

摘要

背景：特异性下调白细胞介素1β蛋白的表达可以有效缓解外周神经损伤后病理性疼痛。与siRNA相比，shRNA可以更加稳定、高效地抑制目的基因的表达，但是单纯的shRNA无法高效地进入靶细胞中发挥对目的基因的下调作用，而腺病毒载体具有宿主范围广、感染效率高以及能够在宿主细胞中稳定表达等特点。<br>　　目的：构建大鼠白细胞介素1β基因的shRNA腺病毒载体并检测其对目的基因表达的影响。<br>　　方法：根据NCBI查询获得的大鼠白细胞介素1β基因序列设计3条 siRNA 并合成相应的 shRNA，分别为shRNA1、shRNA2、shRNA3。采用3’和5’单链退火得到的shRNA片段与经过BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切的pHBAd/U6/GFP干扰载体连接，构建白细胞介素1βshRNA腺病毒载体穿梭质粒。测序后将穿梭质粒与骨架质粒共转染HEK293细胞，进行白细胞介素1β基因的shRNA腺病毒载体(rAd/shRNAs)的包装与扩增，分别为rAd/shRNA1、rAd/shRNA2、rAd/shRNA3。将rAd/shRNAs感染大鼠H9C2细胞，使用荧光显微镜观察其感染效率，采用Western Blot 检测rAd/shRNAs对目的基因表达的影响。<br>　　结果与结论：测序结果显示白细胞介素1β基因的3条shRNA腺病毒载体穿梭质粒中的序列分别与所设计的3条 shRNA 序列相同；并成功构建了大鼠白细胞介素1β基因的 shRNA 腺病毒载体(rAd/shRNA1、rAd/shRNA2、rAd/shRNA3)。rAd/shRNA1、rAd/shRNA2、rAd/shRNA3均可以下调白细胞介素1β的表达，其中rAd/shRNA2的下调效果最明显。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张宇	山西医科大学生理学教研室	55	163	6.0	9.0
2	刘艳芳		8	37	2.0	6.0
3	陈建平	山西医学科学院山西大医院麻醉科	15	114	6.0	10.0
4	赵晓龙		5	38	3.0	5.0
5	李航		2	28	2.0	2.0
6	高文燕		2	11	2.0	2.0
7	韩磊		5	55	3.0	5.0
8	邓亚南		3	32	2.0	3.0