SD大鼠白细胞介素10复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定术

• 作者: 唐冰 宋仁刚 朱家源 朱斌 朱旭红 李爽 毕良宽
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素10.腺病毒载体 基因疗法
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 组织构建相关实验造模
• 页码范围: 1397-1400
• 页数: 4页
• 分类号: R349.83
• 字数: 1372字
• 语种: 中文

摘要

背景:重组腺病毒质粒的构建是重组腺病毒制备过程中的中枢环节,传统的细胞内同源重组法步骤多、成功率低、实验周期长.目的:构建含有大鼠白细胞介素10(rlL-10)基因的重组复制缺陷型腺病毒Ad.rlL-10,为真核表达及其动物模型的研究提供实验基础.设计、时间及地点:开放性实验,于2005-07/2006-04在中山大学附属第一医院完成.材料:SD大鼠1只.AdEasy系统由美国John Hopkins肿瘤研究中心惠赠.ThermoscriptTMRT kit 和Trizol 为Invitrogen产品;HEK-293保存于中山大学动物实验中心细胞库;克隆大鼠白细胞介素10基因引物合成及测序由上海博亚生物技术有限公司完成.方法:采用反转录聚合酶链反应的方法从健康SD大鼠脾脏新鲜组织中提取的总RNA中克隆rIL-10基因,采用AdEasy-1腺病毒载体系统经E.CoilBJ5183细菌内同源重组及HEK.293包装而获得重组腺病毒Ad.rlL-10.主要观察指标:用Western blot和RT-PCR的方法鉴定Ad.rlL-10并进行滴度测定.结果:自健康SD大鼠脾脏组织中克隆rIL-10基因,构建出重组腺病毒Ad.rlL-10.经PCR扩增、酶切鉴定、DNA 测序最终确定插入序列为rlL-1 0,Western blot和RT-PCR均检测出细胞内rlL-10基因及其蛋白表达.再通过扩增、纯化后获得滴度为1.0x1014pfu/mL的重组腺病毒.结论:采用AdEasy-1系统,经细HEK-293细胞包装、扩增,纯化后获得足够数量和质量的病毒,方法简便易行,结果稳定可靠.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱斌	中山大学附属第一医院烧伤外科	47	370	11.0	17.0
2	唐冰	中山大学附属第一医院烧伤外科	48	420	12.0	18.0
3	朱家源	中山大学附属第一医院烧伤外科	57	450	12.0	18.0
4	李爽	南方医科大学珠江医院烧伤科	11	41	4.0	6.0
5	朱旭红	甘肃省人民医院老年病研究所	11	39	4.0	6.0
6	毕良宽	中山大学附属第一医院烧伤外科	14	67	5.0	8.0
7	宋仁刚	深圳市人民医院整形外科	2	3	1.0	1.0