小鼠抗中东呼吸综合征冠状病毒刺突蛋白受体结合区单克隆抗体的筛选

• 作者: 王慧娟 王文玲 蓝佳明 谭文杰 邓瑶
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 中东呼吸综合征 冠状病毒 S蛋白 RBD 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 中东呼吸综合征专栏
• 页码范围: 88-92
• 页数: 5页
• 字数: 3677字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2016.02.002

摘要

目的：制备抗中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus, MERS-CoV)刺突蛋白(S)受体结合区(receptor binding domain,RBD)的单克隆抗体(单抗),并对其特性进行鉴定。方法将昆虫-杆状病毒表达的 MERS-CoV S 蛋白 RBD 片段纯化后免疫 BALB/ c 小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞 Sp2/0融合,通过有限稀释法筛选阳性克隆,用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫印迹法(Western blot)和 MERS-CoV 假病毒中和试验对所获得的细胞克隆进行筛选和鉴定。结果共筛选出12株杂交瘤细胞,ELISA 证实其分泌的单抗与 MERS-CoV S 蛋白 RBD 片段有特异反应；双抗体夹心法鉴定其中两株单抗2E4和2F3为免疫球蛋白 IgM 型,其余10株均为 IgG1型；MERS-CoV 假病毒中和试验结果显示4株单抗：1F1、2E4、3C3、3E6有中和活性；Western blot 分析表明单抗1F1、2E4、3C3、3E6能特异识别 MERS-CoV S 蛋白,而不与 SARS-CoV S 蛋白的 RBD 反应。结论我们制备了12株针对 MERS-CoV S 蛋白 RBD 的鼠源单抗,所获杂交瘤细胞株特异性强,分泌抗体性能稳定,其中4株具有中和活性。