H5N1禽流感病毒感染豚鼠体内线粒体抗病毒信号蛋白SYBR Green Ⅰ相对荧光定量PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 刘旭光 孙丽娟 张坤 杨松涛 王铁成 许微微 郭骐源 高玉伟 黄耕
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: H5N1禽流感病毒 豚鼠 线粒体抗病毒信号蛋白 SYBR Green Ⅰ相对荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 79-83
• 分类号: R373.1+3|Q789
• 语种: 中文

摘要

目的 建立H5N1禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)感染豚鼠体内线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)SYBR Green Ⅰ相对荧光定量PCR检测方法,并检测H5N1AIV感染前、后豚鼠肺脏组织中MAVS的表达水平.方法 提取豚鼠肺脏组织RNA,反转录合成cDNA,将cDNA模板按10倍系列稀释为9个浓度(1.00E+ 10～ 1.00E+02copies/μl),进行PCR扩增.以β-actin为内参,建立标准曲线,比较两基因的扩增效率,验证该方法的引物特异性、重复性及灵敏度.同时用该方法检测H5N1AIV攻毒前、后豚鼠肺脏组织中MAVS的表达水平.结果 cDNA模板最佳稀释度范围为1.00E+09～1.00E+04.豚鼠MAVS和β-actin基因的标准曲线斜率差值＜0.1,R2=0.999,扩增效率分别为100.2％和100.3％;两基因扩增溶解曲线峰单一,可扩增出清晰的目的条带,且无非特异性扩增;两基因Ct值的变异系数(CV)均＜10％;灵敏度为1.00 E+03 copies/μl.感染H5N1AIV的豚鼠肺脏组织中MAVS的表达水平下调.结论 成功建立了H5N1AIV感染豚鼠体内MAVS的SYBR GreenⅠ相对荧光定量PCR检测方法,并发现H5N1AIV感染可导致豚鼠体内MAVS表达水平下调.