禽类多瘤病毒APV-1晚期基因多顺反子的EGFP标记载体构建和表达

• 作者: 刘琳 李劲
• 来源期刊: 中南民族大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 禽类多瘤病毒 增强绿色荧光蛋白 重组质粒 转染 表达
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 39-43
• 页数: 5页
• 分类号: Q291
• 字数: 3971字
• 语种: 中文

摘要

为研究禽类多瘤病毒晚期基因多顺反子翻译起始调控的机制,设计和构建了以增强绿色荧光蛋白( EGFP)报告基因替代病毒APV-1野生型的晚期结构蛋白VPs基因的真核双顺反子表达载体,并观察其在转染进入禽类原代成纤维细胞中的表达翻译状态。以APV-1的cDNA克隆(pHL1003)为模板,运用PCR技术扩增出与野生型病毒APV-1相同的Ori区、早期编码区和晚期Agno-1a区序列作为载体片段；从质粒pEGFP-N1中扩增出编码绿色荧光的EGFP DNA片段；经连接构成重组质粒pHL1003-GFP,通过脂质体细胞转染方法将质粒DNA转染到鸡胚胎和鹌鹑胚胎成纤维细胞中,通过细胞培养观察荧光表达状况。 DNA序列分析证实了重组克隆中的EGFP序列与已知的质粒pEGFP-N1中EGFP序列一致。转染72 h后观察鸡和鹌鹑胚胎成纤维细胞,转染成功胚胎细胞明显表达较强的荧光,说明GFP可以在构建的双顺反子重组质粒的下游中正常表达并产生荧光。 pHL1003-GFP重组质粒的构建及其在禽类原代成纤维细胞中的高效表达,为我们研究多顺反子翻译起始调控中Agno-1a基因的表达对下游病毒结构蛋白基因的翻译调控机制提供了简洁易用的系统和模型。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李劲	中南民族大学生命科学学院	14	52	5.0	6.0
2	刘琳	中南民族大学生命科学学院	1	2	1.0	1.0