环境水体中痢疾志贺菌荧光定量PCR检测方法研究

• 作者: 孙宗科 毛怡心 郑萍 陈西平
• 来源期刊: 环境与健康杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 痢疾志贺菌 荧光定量PCR 细菌性痢疾 侵袭性质粒抗原H
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 145-148
• 分类号: R117
• 语种: 中文
• DOI: 10.16241/j.cnki.1001-5914.2016.02.015

摘要

目的 对环境水体中痢疾志贺菌荧光定量PCR检测方法进行研究和评价.方法 根据痢疾志贺菌侵袭性质粒抗原H(invasion plasmid antigen H,ipaH)基因设计引物,利用普通PCR方法扩增其ipaH基因并将其与T载体进行连接以获得ipaH-T重组质粒;对重组质粒进行梯度稀释后进行荧光定量PCR,观察其标准曲线及最低检出限;提取17株可在环境水样中存在的多种致病菌DNA并以同样反应体系进行荧光定量PCR,验证该方法的特异性;将痢疾志贺菌加标于地表水水样中,测试该方法的环境样品检测能力.结果 成功扩增痢疾志贺菌ipaH基因并连接T载体;通过荧光定量PCR检测各梯度浓度重组质粒的Ct值间隔相近,检出限低至10 copies;17株致病菌DNA的检测结果均为阴性,显示该方特异性好;在环境地表水菌落总数为3.5× 103 CFU/ml、痢疾志贺菌加标浓度低至5 CFU/ml时,仍可以通过该方法检出,显示该方法的抗干扰能力强,可用于环境水样的直接检测.结论 通过荧光定量PCR方法可实现对水中痢疾志贺菌进行快速检测,检测时限3h以内,检测浓度5 CFU/ml,特异性及抗干扰性好,可用于污染水样的快速直接检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙宗科	中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所	44	171	7.0	11.0
2	陈西平	中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所	57	258	9.0	13.0
3	郑萍	中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所	27	80	6.0	8.0
4	毛怡心	中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所	12	18	2.0	4.0