C端截断的HBX突变体通过上调DR4和DR5表达促TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡

• 作者: 周凯 孔凡运 寇艳波 尤红娟 房贤达 李向阳 胡威 郑葵阳 魏肖
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: HBX突变体 肝癌细胞 DR4 DR5 TRAIL
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 480-485
• 页数: 6页
• 分类号: R392
• 语种: 中文
• DOI: 10.13431/j.cnki.immunol.j.20160094

摘要

目的 探讨不同的HBX截断突变体对TRAIL-R1 (DR4)和TRAIL-R2(DR5)表达的影响,以及DR4和DR5在HBX截断突变体增强TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡中的作用.方法 构建HBX的1～120 aa(C端截断)、51 ～ 120 aa(C端和N端共同截断)和51 ～ 155 aa(N端截断)的突变体表达载体HBX1、HBX2和HBX3;在HepG2和Huh-7肝癌细胞中,Real-time PCR和Western blot检测稳定转染HBX不同突变体的DR4和DR5的表达;Western blot检测RNA小干扰载体(DR4-siRNA和DR5-siRNA)的HBX突变体的DR4和DR5表达情况,流式细胞术检测TRAIL (200 ng/ml)诱导的肝癌细胞凋亡情况.结果 经PCR扩增和双酶切鉴定,3种突变体表达载体HBX1、HBX2和HBX3重组质粒构建成功,测序检测目的基因序列正确;Real-time PCR和Western blot表明,HBXI能显著增加2种肝癌细胞系中的DR4和DR5基因和蛋白的表达;而HBX2和HBX3对DR4和DR5基因和蛋白的表达无显著影响;在HepG2-HBX1和Huh-7-HBX1细胞中,与对照组相比,DR4-siRNA和DR5-siRNA显著降低了DR4、DR5的表达;流式细胞术检测结果显示HepG2-HBX1和Huh-7-HBX1细胞的凋亡率较对照组细胞均显著提高;RNA小干扰抑制DR4和DR5的表达后,HepG2-HBX1和Huh-7-HBX1细胞的凋亡率下降.结论 成功构建了3种不同HBX突变体的真核表达载体;HBX基因C端截断(1～120 aa)的突变体能够上调DR4和DR5的表达,且能够上调DR4和DR5的表达促进TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡.