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3-甾酮-9α-羟基化酶基因在分枝杆菌中强化表达
3-甾酮-9α-羟基化酶基因在分枝杆菌中强化表达
作者:
李剑锋
王贵娥
范永仙
陈小龙
陈艺强
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
甾体药物
3-甾酮-9α-羟基化酶
9α-OH-AD
重组质粒
植物甾醇
生物转化
摘要:
9α-羟基雄烯二酮(9α-OH-AD)是制备倍他米松及地塞米松等甾体类药物的重要中间产物之一,在工业应用中,常使用谷甾醇、豆甾醇和菜油甾醇等植物甾醇作为底物,通过分枝杆菌等菌种生物转化获得9α-OH-AD.在此过程中,3-甾酮-9α-羟基化酶(KSH)是生物转化植物甾醇为9α-OH-AD的关键酶,该酶由3-甾酮-9α-羟基化酶(KshA)和3-甾酮-9α-羟基化酶还原酶(KshB)两个亚基构成.因此,提高3-甾酮-9α-羟基化酶的活性对促进9α-OH-AD的合成具有极其重要的作用.为了获得高效积累9α-OH-AD产物的重组菌株,根据NCBI提供的基因序列为主,相关设计引物软件Prime 5和DNAMAN等辅助工具设计引物KshA和KshB,PCR扩增,经过EcoRⅠ、NdeⅠ和EcoRⅠ、Hind Ⅲ分别双酶切KshA和KshB,同时与载体pNIT进行连接,获得了含有KshA基因和KshB基因的重组质粒pNIT-KshA-KshB,最后再将构建好的质粒电转化入分枝杆菌中,根据最小抑菌浓度卡那霉素抗性平板上筛选得到1株阳性转化子M-ksH.发酵催化积累9α-OH-AD的实验结果表明,当底物植物甾醇投料为10 g/L时,M-ksH积累9α-OH-AD产量相比较出发菌株提高了0.486 g/L,重组菌的转化率提高了50.78%.研究结果可为提高甾体类药物9-OH-AD生产效率提供一定的基础.
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篇名
3-甾酮-9α-羟基化酶基因在分枝杆菌中强化表达
来源期刊
药物生物技术
学科
生物学
关键词
甾体药物
3-甾酮-9α-羟基化酶
9α-OH-AD
重组质粒
植物甾醇
生物转化
年,卷(期)
2016,(5)
所属期刊栏目
研究论文
研究方向
页码范围
381-384
页数
4页
分类号
Q81
字数
语种
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期刊影响力
药物生物技术
主办单位:
中国药科大学
中国医药科技出版社
中国药学会
出版周期:
双月刊
ISSN:
1005-8915
CN:
32-1488/R
开本:
16开
出版地:
南京童家巷24号
邮发代号:
28-243
创刊时间:
1994
语种:
chi
出版文献量(篇)
2585
总下载数(次)
20
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