pEGFP-N1脂质体转染方法的优化及其应用

• 作者: 向国艳 孔繁利 方芳 李凤娥 杨紫嫣 郑岩 郝峰
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 脂质体 pEGFP-N1 转染 甲状腺滤泡上皮细胞
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 方法学
• 页码范围: 612-616,后插4
• 页数: 6页
• 分类号: R361
• 字数: 3685字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20160338

摘要

目的:应用脂质体介导的转染方法将pEGFP-N1转染入Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞中,并获得较佳的优化方案,阐明该优化条件在转染其他目的基因时的适用性.方法:分别选取不同配比的质粒和脂质体,将pEGFP-N1转入Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞.转染后36 h,倒置荧光显微镜和流式细胞术检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达情况和转染效率;台盼蓝染色法检测细胞存活率,以此获得优化的转染条件.同时将pEGFP-Aquaporin2、pEGFP-Aquaporin4和pEGFP-Aquaporin5分别以上述条件转染,并获取相应优化的转染条件.结果:在质粒质量固定的条件下,随着脂质体质量的增加,其转染效率和细胞存活率升高;但是当质粒:脂质体＞1∶4时,转染效率和细胞存活率下降.在质粒和脂质体比例固定而质量增加时,其转染效率和细胞存活率下降;当质粒:脂质体＞3.2 μg∶12.8μL时,转染效率降低.应用脂质体介导的方法转染pEGFP-N1和转染pEGFP-Aquaporin2、pEGFP-Aquaporin4和pEGFP-Aquaporin5时,在质粒与脂质体的配比为1∶4(3.2 μg∶12.8 μL)时,转染效率达最高.结论:在应用脂质体介导的目的基因转染时,pEGFP-N1优化的转染条件具有较为广泛的适用性,可用作后续目的基因高效转染优化条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	向国艳	北华大学基础医学院	1	2	1.0	1.0
2	郝峰	北华大学基础医学院	1	2	1.0	1.0