海带磷酸甘露糖变位酶（PMM）基因的克隆与表达分析

• 作者: 于雪 姚建亭 张朋艳 段德麟
• 来源期刊: 海洋科学
• 学科: 地球科学
• 关键词: 海带 磷酸甘露糖变位酶 岩藻聚糖 褐藻胶 实时定量 PCR 分析
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 页码范围: 32-39
• 页数: 8页
• 分类号: X55
• 字数: 5293字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11759/hykx20150113001

摘要

磷酸甘露糖变位酶(PMM)是褐藻胶和岩藻聚糖合成过程中的关键酶之一。本研究利用 cDNA 末端快速克隆(RACE)技术,获得2条海带 PMM 基因(Sjpmm1, Sjpmm2)序列。其中, Sjpmm1的开放阅读框(ORF)长759 bp,其编码的 SjPMM1为卤酸脱卤酶(HAD)超家族成员,含252个氨基酸,分子量约为28.51 kDa；而 Sjpmm2的 ORF 长1866 bp,其编码的 SjPMM2属于磷酸己糖变位酶超家族的成员,含621个氨基酸,分子量约为66.49 kDa。海带 PMM 的二级结构均以a-螺旋为主。进化分析表明, Sjpmm1来自于原始真核生物,而 Sjpmm2来源于质体的第一次内共生作用。实时定量 PCR 分析发现,海带受到高温或低温胁迫时, Sjpmm1和 Sjpmm2转录水平上升,以合成岩藻聚糖抵抗环境影响。此外,利用pMAL-c5X 载体对 SjPMM1进行体外表达,得到高浓度的可溶性融合蛋白,为后续的 SjPMM 功能分析提供基础。