利用 CRISPR/Cas9技术敲除水稻 Pi21基因的效率分析

• 作者: 仲维功 朱金燕 李文奇 杨杰 王军 王芳权 范方军
• 来源期刊: 中国水稻科学
• 学科: 农学
• 关键词: CRISPR/Cas9 稻瘟病 Pi21 基因敲除
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 469-478
• 页数: 10页
• 分类号: Q755|S511.01
• 字数: 5824字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16819/j.1001-7216.2016.6009

摘要

利用 CRISPR/Cas9技术，针对 Pi21基因的两个靶位点(靶位1和靶位2)，构建基因敲除载体，转化水稻品种南粳9108.经 PCR 鉴定，获得了28株 T0代阳性转基因植株.对靶位点酶切检测发现，靶位1突变效率为78．57％，靶位2突变效率为92．86％；靶位1和靶位2同时突变的效率为78．57％，突变效率较高.通过对靶位点进行测序，发现靶位点突变类型较多，包括碱基缺失、碱基插入、碱基缺失后插入其他碱基和大片段 DNA 缺失等类型.对突变株系进行氨基酸预测，发现大部分株系都存在移码突变现象而使基因突变彻底，少数株系表现为部分氨基酸的缺失或变异.成功敲除了水稻 Pi21基因，并对突变效率和类型进行了分析，为进一步验证 Pi21基因功能、培育广谱抗稻瘟病的水稻新品系奠定了基础.