HCMV潜伏相关UL138基因重组腺病毒的构建及其对THP-1单核细胞功能的影响

• 作者: 叶璐璐 孙祥威 张丽芳 张良 林巧爱 沈贤 章慧娣 薛向阳 郭刚强 陈文静 陈静
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 人巨细胞病毒 潜伏感染 UL138 重组腺病毒 THP-1 单核细胞 趋化因子及受体
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 病毒学
• 页码范围: 667-675
• 页数: 9页
• 字数: 6994字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2016.09.005

摘要

目的：构建含人巨细胞病毒( HCMV)潜伏相关 UL138基因的重组腺病毒,探讨UL138基因对THP-1单核细胞功能的影响。方法构建携带UL138基因的重组腺病毒,利用TCID50法确定重组腺病毒滴度。重组腺病毒以不同MOI比值感染THP-1细胞,通过绿色荧光蛋白表达确定感染THP-1细胞最佳MOI值；定量PCR分析UL138表达对THP-1细胞前炎症细胞因子表达变化,通过定量PCR芯片分析趋化因子及受体的表达变化。结果成功构建了携带UL138基因的重组腺病毒,TCID50法测定病毒的滴度达1×1011 PFU/ml。利用重组腺病毒携带的绿色荧光蛋白表达检测THP-1细胞的感染率,结果显示,重组腺病毒以MOI=1∶100感染THP-1细胞,感染率为60%, RT-PCR和Western blot证实了THP-1细胞能够表达UL138,且随着时间的延长,蛋白表达量逐渐增多。定量PCR检测发现,THP-1细胞 UL138过表达后,可明显抑制IL-18、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等前炎性细胞因子的表达。定量PCR芯片分析显示,UL138表达明显改变THP-1单核细胞内趋化因子及受体的表达,除外 CCL17、CCL21、CCL22、XCL2等趋化因子以及 CCR2、CXCR1、CXCR2、 CXCR4及CX3CR1等趋化因子受体在不同时间点上调表达外, CXCL1、CXCL3、CXCL9、CXCL10、CXCL11等大部分趋化因子及受体的表达均显著减少。结论成功构建了可感染THP-1单核细胞的UL138基因重组腺病毒；THP-1单核细胞过表达UL138可明显影响其功能。