兔肝细胞中与RHDV VP60P2亚区相互作用蛋白质的筛选和初步鉴定

• 作者: 仇汝龙 刘星 姜平 宋艳华 李腾 王芳 胡波 范志宇 魏后军
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 兔出血症病毒(RHDV) VP60 P2亚区 免疫共沉淀 层黏连蛋白受体(LamR)
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 549-558
• 页数: 10页
• 分类号: S855.3|S852.659.6
• 字数: 6584字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.03.018

摘要

兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60 P2亚区在病毒感染宿主细胞过程中可能起重要作用,为找寻RHDV靶细胞——兔肝细胞中与P2亚区相互作用的蛋白质,以原核表达的P2蛋白为诱饵蛋白质,通过免疫共沉淀试验(Co-IP)结合质谱分析筛选与之有相互作用的肝细胞蛋白质.经分析选取层黏连蛋白受体(LamR)蛋白做进一步研究.提取兔肝细胞总RNA,反转录扩增LamR基因,将其插入pGEX-6p-1载体,经IPTG诱导表达,获得GST-LamR融合蛋白,并通过GST pull-down试验验证LamR蛋白与P2蛋白的结合.结果显示,以P2蛋白为诱饵蛋白质,免疫共沉淀试验结合质谱分析共筛选到26个与P2存在相互作用的肝细胞蛋白质,其中LamR蛋白是多种病毒的受体.通过原核表达系统表达了LamR蛋白,经pull-down试验验证了LamR蛋白与P2蛋白有直接的相互作用.本研究证实兔肝细胞LamR蛋白与RHDV VP60 P2蛋白的相互作用,为深入研究RHDV的感染过程、揭示RHDV的致病机制提供了线索.