米曲霉中蓝藻抗病毒蛋白-N基因的克隆与表达

• 作者: 云帆 付显令 孙萍 林俊芳 谢露 郭丽琼 黎倩怡
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 蓝藻抗病毒蛋白-N 酱醪 米曲霉 基因克隆 基因表达
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 126-129,157
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2016.02.0023

摘要

[目的]提高蓝藻抗病毒蛋白-N(CVN)的异源表达量,获得大量高纯度可溶性蛋白.[方法]采用RT-PCR从酱油发酵酱醪宏基因组中克隆获得CVN基因cvn-SF,构建了重组表达载体pET32a-cvn-SF,转化E.coli BL21菌株,获得工程菌株,优化表达条件,通过Ni-NTA凝胶亲和层析对CVN-SF蛋白进行纯化.[结果]工程菌株在温度30℃、添加1 mmol/L的IPTG诱导剂、培养时间12 h的条件下获得最高表达量的可溶性蛋白.Ni-NTA凝胶亲和层析纯化得到了230.8 mg/L的CVN蛋白,占提取总蛋白含量的33.37％.[结论]所得CVN蛋白高于目前报道的CVN在大肠杆菌的最高表达量140 mg/L1[1].