基于 CRISPR/Cas9系统的 OsbHLH116基因编辑及其脱靶效应分析

• 作者: 孙红正 季新 张静 彭廷 李俊周 杜彦修 赵全志 陈会杰
• 来源期刊: 中国水稻科学
• 学科: 农学
• 关键词: 水稻 基因编辑 CRISPR/Cas9 脱靶效应 OsbHLH1 16
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 577-586
• 页数: 10页
• 分类号: Q755|S511.01
• 字数: 5816字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16819/j.1001-7216.2016.6024

摘要

以水稻 OsbHLH116基因为编辑对象,根据基因编码区序列(CDS)在第一外显子区域设计长度为19 bp 的 sgRNA,化学合成 sgRNA 的寡核苷酸序列,然后与 CRISPR/Cas9系统表达载体 pBUN411连接,再用农杆菌介导法获得水稻转基因株系,最后利用酶切和测序相结合的方法对 OsbHLH116突变体进行了筛选鉴定和脱靶效应分析。结果表明,所构建的pBUN411-gRNA 载体成功实现了对基因 OsbHLH116的定向编辑。酶切分析表明在选取的10株 T0代转基因苗中得到了6个 OsbHLH116突变单株。对6个突变单株进行了 TA 克隆测序分析,发现了纯合突变、双等位突变和杂合突变3种类型。酶切分析表明2个潜在脱靶位点均未发生脱靶效应。