基于CRISPR/Cas9系统定点编辑小鼠MAD2L1基因及其脱靶效应分析

• 作者: 周晓辉 彭秀华 李顺 王超 谭丹 赵锐 陈丽香 韩铖潇
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: CRISPR/Cas9 小鼠 MAD2L1 脱靶效应
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 587-593
• 页数: 7页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 4074字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.06.001

摘要

目的 建立利用CRISPR/Cas9系统对小鼠MAD2L1基因第二外显子基因编辑的方法体系,并分析CRISPR/Cas9对MAD2L1基因编辑的脱靶效应.方法 通过CHOPCHOP网站设计位于小鼠MAD2L1基因第二外显子的靶点序列,并构建Cas9-MAD2L1载体,将该载体转染到NIH/3T3细胞中,通过嘌呤霉素筛选并结合荧光显微镜观察GFP后,提取细胞转染后的基因组DNA,利用PCR方法,结合T7E1分析和桑格尔测序,鉴定对小鼠MAD2L1基因编辑情况,并对转染后的NIH/3T3细胞进行CRISPR/Cas9脱靶效应分析.结果 将Cas9?MAD2L1载体转染到NIH/3T3细胞并进行嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜下观察到大量表达GFP的细胞,PCR结合T7E1结果显示,以转染后的细胞DNA为模板扩增出的228 bp MAD2L1 PCR产物,可被酶切成166 bp和62 bp片段,测序结果显示,成功对MAD2L1基因第二外显子靶点处进行基因编辑,脱靶效应分析未检测到CRISPR/Cas9有对脱靶位点进行基因编辑.结论 成功建立对小鼠MAD2L1基因第二外显子进行基因编辑的方法体系,设计的对MAD2L1基因编辑靶点未检测到脱靶效应的发生.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	彭秀华		22	110	5.0	9.0
2	周晓辉		15	59	4.0	7.0
3	陈丽香		7	15	2.0	3.0
4	谭丹		1	2	1.0	1.0
5	韩铖潇	上海交通大学农业与生物学院	2	3	1.0	1.0
6	赵锐		1	2	1.0	1.0
7	王超		1	2	1.0	1.0
8	李顺		3	15	2.0	3.0