Thermus aquaticus DNA连接酶的连接特性研究

• 作者: 于欣 安然 梁兴国 王静
• 来源期刊: 中国海洋大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: Taq DNA连接酶 发卡结构 短片段
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 50-55
• 页数: 6页
• 分类号: Q783.2
• 字数: 5240字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16441/j.cnki.hdxb.20150057

摘要

为进一步研究Thermus aquaticus(Taq) DNA连接酶的作用机理、开发以DNA连接作为关键步骤的新生物技术,本文以含有超稳定发卡结构的DNA(带有11 nt长的单链部分)和另一条单链DNA为连接底物,研究了片段长度、反应温度、连接位点的结构特性、聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)的添加等对连接的影响,探讨了Taq DNA连接酶的连接特性.连接结果显示:单链DNA的3'端同发卡结构Ⅰ底物相连的连接率,比单链DNA的5'端同发卡结构Ⅱ底物相连的连接率更高;可以连接的最短单链DNA片段的长度为6 nt;在20～65℃范围内,一般连接率随温度升高而升高.在连接时,由2条底物通过互补配对形成的复合体的热稳定性对连接率影响不大,一般在连接温度远远高于该复合体的熔点(Melting Temperature,Tm)时仍有很高的连接率.在70或75℃时,虽然连接率有所降低,但仍然可以连接9 nt的单链DNA片段.研究还发现,在片段连接上,PEG 6000对较难连接的片段(6～7 nt)有促进作用,对容易连接的片段(8～10 nt)促进作用不显著,甚至有一定抑制作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王静	中国海洋大学食品科学与工程学院	73	350	10.0	17.0
2	安然	中国海洋大学食品科学与工程学院	15	66	4.0	8.0
3	梁兴国	中国海洋大学食品科学与工程学院	30	82	5.0	8.0
4	于欣	中国海洋大学食品科学与工程学院	1	0	0.0	0.0