过表达死亡结构相关蛋白加剧胆固醇β环糊精诱导的巨噬细胞凋亡

• 作者: 崔淑华 庹勤慧 张燕 文娟 李天平 杨冬梅 熊国祚 邱飞
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 死亡结构相关蛋白 胆固醇蓄积 巨噬细胞 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 239-244
• 分类号: R363
• 语种: 中文

摘要

目的 巨噬细胞凋亡在动脉粥样斑块的发展、病灶的坏死、斑块的不稳定以及急性血管事件中起着重要的作用,因此研究死亡结构相关蛋白(Daxx)对巨噬细胞凋亡的调控作用有利于揭示新的药物靶点,为动脉粥样硬化的发生与发展提供理论依据.方法 应用脂质体2000将pCDNA3.1-Daxx、pCDNA3.1转入RAW264.7细胞中,G418(500 mg/L)筛选15天后,建立过表达Daxx稳定细胞株,RT-PCR和Western blot检测稳定细胞株内Daxx的转染效率.模型组和转染的细胞用胆固醇β环糊精(Chol:MβCD)孵育48 h,建立RAW264.7荷脂和细胞凋亡模型,运用酶荧光法检测细胞内胆固醇蓄积情况,MTT检测细胞活性,流式细胞术观察细胞凋亡.Westem blot测定细胞内Caspase3蛋白的表达.结果 RT-PCR和Western blot检测转染细胞内Daxx mRNA和蛋白明显高表达,表明稳定转染成功.在Chol:MβCD的诱导下,模型组细胞内胆固醇的含量升高,细胞活性下降,凋亡数目增加.而Daxx高表达组可以加剧Chol:M3CD诱导的胆固醇蓄积,细胞活性显著下降,凋亡细胞数目明显增加;同时,Daxx转染细胞组Caspase3蛋白表达明显增高.结论 过表达Daxx可以加剧胆固醇β环糊精诱导的巨噬细胞凋亡.