OsKAT3 RNAi转基因水稻植株的构建

• 作者: 王莉 苏彦华 郭满园 黄亚楠
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 水稻 OsKAT3 RNAi pTCK303载体 转基因植株
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 页码范围: 979-985
• 分类号: S336
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/jnau.201603027

摘要

[目的]本研究以水稻‘日本晴’为遗传转化受体材料,利用RNAi技术对水稻气孔调控型钾吸收通道OsKAT3进行功能研究.[方法]通过将OsKA T3与拟南芥和水稻中的KAT类钾通道进行同源性比对,找到编码此蛋白基因C端的一段特异区域,并用于OsKAT3 RNAi表达载体的构建.设计含有相应酶切位点的引物扩增该特异片段,以OsKA T3作为模板进行RNAi-OsKAT3顺式和反式目的片段的PCR扩增.经菌落PCR鉴定挑选阳性克隆后送测序,测序结果表明:RNAi-OsKAT3顺式和反式目的片段均已正确连接到pMD19-T载体上,分别利用Sac Ⅰ/SpeⅠ和BamH Ⅰ/Kpn Ⅰ酶切RNAi-OsKA T3顺式和反式目的片段,并将其连接到含有发夹结构的质粒pTCK303上,然后采用农杆菌介导的方法将经酶切验证正确的OsKA T3RNAi表达载体转化到水稻‘日本晴’中.[结果]以表达载体pTCK303多克隆位点两侧的通用引物进行转基因阳性植株鉴定,PCR结果显示OsKA T3顺式和反式特异片段已成功整合到再生水稻植株基因组中,定量PCR结果也证实RNAi转基因植株中OsKA T3基因表达被成功抑制.[结论]通过RNAi技术成功沉默了OsKA T3基因并获得T0代种子,为后续研究该基因功能奠定了一定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王莉		133	1198	19.0	29.0
5	苏彦华	中国科学院南京土壤研究所土壤与农业可持续发展国家重点实验室	11	24	3.0	4.0
6	黄亚楠		1	2	1.0	1.0
10	郭满园		2	6	2.0	2.0