Ⅰ型登革病毒NS1蛋白检测体系的建立及在2014年广东登革疫情诊断中的应用

• 作者: 丁细霞 丘立文 余楠 温坤 潘玉先 车小燕 郭勇晖 陈月 陈满君
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 登革病毒 非结构蛋白 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 430-434
• 页数: 5页
• 分类号: R446.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.13431/j.cnki.immunol.j.20160084

摘要

目的 以Ⅰ型登革病毒(DENV)非结构蛋白1(NS1)为免疫原制备NS1特异性单克隆抗体,建立Ⅰ型登革病毒NS1抗原特异性检测方法,并应用于广东以Ⅰ型登革感染为主的临床血清标本检测.方法 用原核表达的重组登革病毒NS1蛋白和灭活的Ⅰ型登革病毒免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合,间接ELISA、免疫荧光和免疫印迹鉴定,获得DENV1NS1特异性单克隆抗体并建立检测方法.结果 共获得26株Ⅰ型登革病毒NS1蛋白特异性结合的单抗.通过对26株1型登革病毒NS1蛋白特异性单抗进行多株抗体组合配对,最终筛选出最佳抗体组合.该组合检测DENV1病毒培养上清的检测限为1∶16 384(12.5 pfu/ml),且与其他3个血清型登革病毒、乙型脑炎病毒和黄热病毒均无交叉反应,对500份健康人血清标本检测中,阴性标本497例,临界3例,对发病0～13d的836份临床确诊的登革热患者血清检测的敏感性为85.6％,明显高于qRT-PCR检测体系(66.3％)(P＜0.001),亦明显高于病毒分离诊断率(P＜0.001).结论 成功获得了1组DENV1-NSl蛋白的特异性单克隆抗体,利用该组抗体建立了1种敏感性和特异性更好的只针对DENV1-NS1蛋白的双抗体夹心检测方法,且比其他方法能够覆盖更宽泛的时间范围,该方法可作为登革热早期诊断的工具.