登革病毒NS1蛋白的原核表达及其在登革热快速诊断中的应用

• 作者: 傅强 周俊梅 庞贤武 方丹云 李兴华 江丽芳 田疆
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 登革病毒 NS1蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 316-321
• 分类号: R373.3
• 字数: 4118字
• 语种: 中文

摘要

[目的]重组表达1型登革病毒( DENV-1)和3型登革病毒(DENV-3)NS1蛋白,制备多克隆抗体,建立特异、敏感的登革病毒NS1抗原ELISA检测法.[方法]RT-PCR扩增DENV-1和DENV-3 NS1全长基因,经T-A克隆后,将目的基因分别与质粒PET30a(+)连接构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21感受态细胞.阳性克隆经IPTG诱导表达,并对目的蛋白进行纯化.用纯化的NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗NS1多克隆抗体.应用NS1多克隆抗体建立登革病毒NS1抗原双抗体夹心ELISA检测法.[结果]成功构建了高效表达DENV-1和DENV-3 NS1蛋白的原核表达系统,获得纯化的NS1蛋白:用重组NS1蛋白免疫BALB/c小鼠后获得高效价(＞1:30000)的抗DENV-1和DENV-3 NS1的特异性抗体；用NS1多克隆抗体建立了登革病毒NS1抗原双抗体夹心ELISA检测法,该法可特异性检出登革病毒NS1抗原,敏感性达到1 ng/mL,与黄病毒的其它成员无交叉反应,表明具有良好的特异性.[结论]本研究成功构建了DENV-1和DENV-3 NS1蛋白的原核表达系统,高效表达了具有良好免疫原性及免疫反应性的DENV-1和DENV-3重组NS1蛋白;建立了检测登革病毒NS1抗原的双抗体夹心法,并证明该检测法具有较高的灵敏度和特异性,具有良好的应用前景.