大鼠心肌细胞自噬H9C2/GFP-LC3稳定株的构建

• 作者: 刘璋楠 樊梦雅 王明丽 王耀辉 祝伟娜
• 来源期刊: 解剖学杂志
• 关键词: 自噬 缺氧/复氧 心肌细胞 绿色荧光蛋白 微管相关蛋白3 3-甲基腺嘌呤
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 427-430
• 页数: 4页
• 字数: 2871字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-1633.2016.04.009

摘要

目的:在大鼠心肌细胞H9C2(2-1)中建立表达绿色荧光蛋白融合微管相关蛋白3(GFP-LC3)的稳定细胞株,为研究心肌细胞自噬提供合适的细胞模型.方法:将表达增强的绿色荧光蛋白融合微管相关蛋白3的质粒(pEGFP-LC3)瞬时转染人胚肾-293T细胞(HEK-293T),通过荧光观察和免疫印迹对质粒进行鉴定;将质粒用同样的方法转染H9C2(2-1)细胞,G418筛选出稳定表达GFP-LC3的细胞株,通过观察荧光和免疫印迹检测GFP-LC3在H9C2中的表达;稳定细胞株在缺氧1h复氧0、6、12、48 h和60 h的模型中,荧光显微镜观察GFP在细胞质中的表达,免疫印迹检测内源性LC3的变化;确定荧光及内源性LC3的高表达时相,用3-甲基腺嘌呤(3MA)进行自噬抑制后观察荧光及内源性LC3蛋白表达情况.结果:荧光观察和免疫印迹检测到GFP-LC3在H9C2中的表达,成功建立了表达GFP-LC3的H9C2稳定株;筛选出荧光及内源性LC3的高表达时相为缺氧1h复氧48 h,在此模型中,GFP-LC3在细胞质中聚集成点状,内源性LC3表达显著升高,细胞经3MA处理后点状聚集减少,内源性LC3表达减弱.结论:成功建立了过表达GFP-LC3的H9C2稳定株,该细胞株为研究心肌细胞自噬奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王耀辉	河南大学医学院抗体药物河南省工程实验室	16	20	2.0	4.0
2	刘璋楠	河南大学医学院抗体药物河南省工程实验室	5	7	1.0	2.0
3	王明丽	河南大学医学院抗体药物河南省工程实验室	17	42	3.0	5.0
4	祝伟娜	河南大学医学院抗体药物河南省工程实验室	2	2	1.0	1.0
5	樊梦雅	河南大学医学院抗体药物河南省工程实验室	1	0	0.0	0.0