利用融合PCR技术和T载体克隆技术构建结核分枝杆菌PhoPR双组份系统缺失突变载体

• 作者: 吴江东 吴芳 张万江 张培培 曹旭东 柳小玲 梁粟 王君 章乐
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 PhoPR双组份系统 缺失突变株 构建
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 276-280
• 页数: 5页
• 分类号: R378.91
• 字数: 4047字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2016.03.013

摘要

目的 基于融合PCR技术(SOE-PCR)、T载体克隆技术,构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)双组份系统缺失突变载体的方法.方法 利用SOE-PCR技术,将PhoP、PhoR和PhoPR基因上、下游的同源臂与卡那霉素抗性基因融合,构建PhoP、PhoR和PhoPR突变片段,然后将突变片段直接与T载体连接,将其转入E.coli DH5α感受态细胞并筛选抗性克隆,进而获得MTB PhoP、PhoR和PhoPR缺失突变载体.结果 成功构建MTB PhoPR双组份系统缺失突变载体,与传统方法相比,效率高、周期短.结论 基于融合PCR技术和T载体克隆技术成功构建MTB PhoPR双组份系统缺失突变载体,为下一步构建MTB突变株以及相关研究奠定基础.