婆娑双树基因4干扰载体对儿童睾丸卵黄囊瘤的转染及干扰效果评价

• 作者: 同毓龙 吕敏 张浩川 林孝坤 陈聪德 陈肖鸣
• 来源期刊: 中华小儿外科杂志
• 关键词: 睾丸卵黄囊瘤 基因表达 转染
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 肿瘤外科专题
• 页码范围: 673-676
• 页数: 4页
• 字数: 3523字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-3006.2016.09.008

摘要

目的 构建婆娑双树基因SALL4的特异性干扰载体并转染儿童睾丸卵黄囊瘤细胞,评价干扰效果,为研究SALL4基因功能提供实验工具.方法 针对不同干扰位点,设计4条特异性siRNA和1条阴性对照序列.构建SALL4干扰质粒载体pGPU6/GFP/Neo-SALL4 shRNA,分空白对照组(Blank组)、阴性对照组(NC组)、单加转染试剂组(MOCK组)、干扰组(SALL4-homo-483、SALL4-homo-1874、SALL4-homo-951、SALL4-homo-3110),分别转染体外培养的儿童睾丸卵黄囊瘤细胞,采用荧光定量PCR和Western bolt技术比较各组细胞SALL4基因mRNA及蛋白表达情况,筛选出最佳干扰序列.结果 荧光定量PCR结果显示,Blank组、NC组、MOCK组、干扰组(SALL4-homo-483、SALL4-homo-951、SALL4-homo-1874、SALL4-homo-3110) SALL4基因mRNA的表达水平分别为100％、(118.0±18.0)％、(128.0±15.0)％、(91.0±21.0)％、(25.0±8.0)％、(59.0±11.0)％、(49.0±13.0)％.SALL4-homo-951、SALL4-homo-3110相比Blank组、NC组、MOCK组mRNA表达下降,差异有统计学意义(F=3.63,P＜0.05).Western bolt的检测结果显示Blank组、NC组、MOCK组、干扰组(SALL4-homo-483、SALL4-homo-951、SALL4-homo-1874、SALL4-homo-3110)SALL4基因蛋白表达水平分别为1、1.1±0.1、1.3±0.3、1.7±0.4、0.2±0.1、0.9±0.2和0.4±0.1.相对Blank组、NC组、MOCK组,SALL4干扰组中SALL4-homo-951、SALL4-homo-3110均能降低蛋白表达,其中SALL4-homo-951降低最多,差异有统计学意义(F=7.96,P＜0.05).结论 SALL4-homo-951、SALL4-homo-3110均能有效干扰SALL4基因在儿童卵黄囊瘤中的表达,其中SALL4-homo-951干扰效果最佳,可用于下一步实验研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕敏	温州医科大学附属第一医院小儿外科	4	8	2.0	2.0
2	林孝坤	温州医科大学附属第一医院小儿外科	7	12	3.0	3.0
3	陈聪德	温州医科大学附属第一医院小儿外科	5	9	2.0	3.0
4	陈肖鸣	温州医科大学附属第一医院小儿外科	25	73	5.0	8.0
5	张浩川	温州医科大学附属第一医院小儿外科	2	4	1.0	2.0
6	同毓龙	温州医科大学附属第一医院小儿外科	1	1	1.0	1.0