针对Asia-1型FMDV的qRT-PCR终点法中和试验的建立及初步研究

• 作者: 宋一鸣 张志东 杨洋
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫病毒 反转录荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR) 病毒复制曲线 病毒中和试验 终点法
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 42-47
• 页数: 6页
• 分类号: S854.4+3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.20160601.00

摘要

为了缩短病毒中和试验(VNT)在口蹄疫病毒(FMDV)疫苗毒株选择以及病原检测中的时间,减少结果判断时人为因素的影响,试验采用qRT-PCR方法改进了传统的VNT,首先建立基于FMDV 3D序列的Taqman探针法qRT-PCR,之后使用FMDV Asia-1/JSL/06毒株感染IBRS-2细胞,提取不同时间收集的细胞病毒混合物的RNA进行qRT-PCR定量检测,获得FMDV Asia-1/JSL/06毒株在IBRS-2细胞中的病毒复制曲线,确定病毒复制的终点时间,即病毒中和试验中加入细胞维持液之后的第20小时,此时使用TRIzol裂解细胞并提取RNA进行qRT-PCR定量检测.以6作为拷贝浓度对数的临界值,拷贝浓度对数大于6的最低稀释度作为终点稀释度,建立了qRT-PCR-VNT方法的终点稀释度判断标准,并应用该方法对19份阴性血清以及4份阳性血清进行qRT-PCR-VNT检测.结果表明:该方法获得的阴性、阳性结果与传统VNT检测获得的结果完全相符.说明该方法具有快速、有效、重复性好等优点,具有代替传统VNT的潜能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨洋	中国农业科学院兰州兽医研究所	17	170	6.0	13.0
2	张志东	中国农业科学院兰州兽医研究所	10	2	1.0	1.0
3	宋一鸣	中国农业科学院兰州兽医研究所	2	0	0.0	0.0