Pax6 PAI亚结构域在黑色素细胞中对MITF、 TYR、TYRP1和TYRP2的影响

• 作者: 于秀菊 杨玉静 段志成 聂瑞强 范瑞文 董常生 许冬梅 谢建山
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: PAI 亚结构域 Pax6 黑色素
• 年，卷（期）: 2016,（17）
• 所属期刊栏目: 畜牧?兽医?资源昆虫
• 页码范围: 3432-3441
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.17.016

摘要

【目的】高度保守的 PAX 转录因子家族在黑色素细胞的分化和黑色素的生成中起重要的作用，其家族共有的PD 结构域是其与下游基因结合的主要位点，而PD结构域氨基端的PAI亚结构域在其与下游基因的结合过程中发挥重要的作用。研究表明 Pax6在视网膜上皮黑色素细胞的分化中发挥至关重要的作用，本试验借助研究Pax6 PAI亚结构域的功能来对PAX转录因子家族共有的PD结构域和PAI亚结构域进行研究。【方法】首先通过Psipred对Pax6 PD 结构域的结构进行分析，使用NCBI对Pax6 PD结构域与下游基因的结合位点进行分析，使用Jaspar对MITF、TYR、TYRP1和TYRP2启动子中Pax6 PD结构域可能的作用位点进行预测。使用普通PCR克隆Pax6 PAI亚结构域，将其连入T载体，酶切后连入慢病毒载体，并送公司测序确认。将构建好的PAI亚结构域过表达载体通过细胞转染导入到培养的小鼠黑色素细胞中，使其过量表达。收集细胞，分别通过观察绿色荧光蛋白检测转染效率，使用RT-PCR 和Western blot 来检测MITF 、TYR 、TYRP1和TYRP2在mRNA 和蛋白水平的变化，同时检测黑色素细胞中黑色素生成量的变化。【结果】通过NCBI分析可知，Pax6 PD结构域与下游基因的作用位点主要集中在氨基端的PAI 亚结构域。通过Jaspar预测分析，得知，MITF启动子-695处存在Pax6 PD 结构域的结合位点，TYR启动子-873和-1133处存在Pax6 PD 结构域的结合位点，TYRP1启动子-629处存在Pax6 PD 结构域的结合位点，TYRP2启动子-655处存在Pax6 PD 结构域的结合位点。在黑色素细胞中过表达Pax6 PAI亚结构域后，与空载组相比，试验组MITF mRNA升高2.05倍（P＜0.01），蛋白质升高1.7倍(P＜0.01)；TYR mRNA升高2.09倍，蛋白质升高2倍(P＜0.05)；TYRP1 mRNA升高2.93倍（P＜0.05），蛋白质升高1.9倍(P＜0.01)；TYRP2 mRNA升高3.62倍（P＜0.01），蛋白质升高1.37倍。同时试验组的黑色素含量是空载组黑色素含量的1.33倍（P＜0.001）。【结论】在小鼠黑色素细胞中，过表达Pax6 PAI亚结构域可以促进MITF、 TYR、TYRP1和TYRP2的表达，进而使黑色素细胞黑色素的生成量增加。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范瑞文	山西农业大学动物科技学院	100	437	10.0	16.0
2	于秀菊	山西农业大学动物科技学院	35	136	6.0	10.0
3	许冬梅	山西农业大学动物科技学院	26	102	4.0	9.0
4	杨玉静	山西农业大学动物科技学院	9	25	3.0	4.0
5	聂瑞强	山西农业大学动物科技学院	7	25	3.0	4.0
6	段志成	山西农业大学动物科技学院	1	4	1.0	1.0