硫化氢通过抑制ROS-TLR4通路对抗高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤和炎症反应

• 作者: 何洁仪 余盛龙 兰军 冯鉴强 梁伟杰 程飞 陈君 黄惠敏
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 硫化氢 活性氧 Toll样受体4 高糖 心肌细胞损伤 炎症反应
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1207-1213
• 分类号: R363
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨外源性硫化氢(H2S)能否通过抑制活性氧(ROS)-Toll样受体4(TLR4)通路对抗高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤和炎症反应.方法 应用细胞计数盒(CCK-8)检测细胞存活率,用试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,ELISA检测细胞培养液中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法测定凋亡细胞数量,Western blot测定TLR4和Cleaved Caspase 3蛋白的表达水平,双氯荧光素染色荧光显微镜照相法测定细胞内ROS水平,罗丹明123染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位(MMP).结果 应用35 mmol/L葡萄糖(高糖)作用H9c2心肌细胞24h能上调TLR4的表达水平.在高糖作用前,应用1000 μmol/L N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理60 min或400 μmol/L硫氢化钠(NaHS)预处理30 min能明显减轻高糖对TLR4蛋白表达的上调作用.高糖作用心肌细胞24h可引起心肌细胞损伤和炎症反应,使细胞存活率降低,LDH活性、凋亡细胞数量、Cleaved Caspase 3蛋白的表达、ROS生成、MMP丢失及IL-1β和TNF-α的分泌增加;400 μmol/L NaHS预处理心肌细胞30 min后再予高糖作用24h或30 μmol/L TAK-242(TLR4抑制剂)和高糖共处理心肌细胞24 h能显著拮抗高糖引起的上述损伤和炎症反应.结论 外源性H2S可通过抑制ROS-TLR4通路对抗高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤和炎症反应.