利用CRISPR/Cas9基因编辑技术抑制肠出血性大肠埃希菌O157∶H7StxⅡ基因表达

• 作者: 史智扬 吴涛 崔仑标 曾晓燕 朱凤才 朱小娟 樊欢 焦永军 葛以跃
• 来源期刊: 江苏预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: CRISPR/Cas9基因编辑技术 EHEC O157∶H7菌株 志贺毒素
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 检测方法专题论著
• 页码范围: 520-523
• 页数: 4页
• 分类号: R378.2
• 字数: 3271字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13668/j.issn.1006-9070.2016.05.03

摘要

目的 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术抑制肠出血性大肠埃希菌(EHEC) O157∶H7 StxⅡ基因表达,并评价其对细菌生长的影响及细胞毒性.方法 针对EHEC O157∶H7 StxⅡ基因设计引物,构建CRISPR/Cas9表达质粒pdCas9-StxⅡ并转化EHEC O157∶H7感受态细胞,采用RT-PCR及胶体金法检测StxⅡ基因表达情况,绘制菌株生长曲线,将菌株培养上清液接种Vero细胞观察细胞病变情况.结果 测序分析显示pdCas9-StxⅡ表达质粒被成功构建;转化EHEC O157∶H7(00G097)感受态细胞后,StxⅡ基因mRNA、蛋白表达均受抑制,EHEC O157∶H7生长曲线未受影响(P值均＞0.05).pdCas9-StxⅡ-00G097菌株培养上清液对细胞的毒性效应(CPE为30％)显著低于对照菌株00G097和pdCas9-00G097 (CPE均＞80％).结论 成功构建的pdCas9-StxⅡ表达质粒能特异抑制EHEC O157∶H7 StxⅡ基因表达、降低细胞毒性,为进一步研究志贺毒素StxⅡ在EHEC O157∶H7致病机理和基因工程减毒活菌苗奠定了基础.