ssc-miR-148a启动子克隆及其特征分析

• 作者: 代小丽 曹丽华 李海艳 李湘萍 梁贤威 沈开元 王萍 石德顺 郝文艳
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: ssc-miR-148a 启动子 克隆 bFGF DNMT1
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 1969-1976
• 页数: 8页
• 分类号: S828|S813.3
• 字数: 4680字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.10.004

摘要

为研究猪miR-148a(ssc-miR-148a)的转录调控机制,对其启动子进行了克隆及分析.本试验首先设计特异性PCR扩增引物,分别得到ssc-miR-148a前体上游3个片段,并将其连接到荧光素酶报告载体pGL3-Basic上.通过生物信息学方法,在线分析ssc-miR-148a启动子大概区域、甲基化部位和转录因子结合部位.将重组报告质粒转染293T细胞,分析启动子活性.采用不同浓度碱性成纤维生长因子(bFGF)处理猪成纤维细胞和转染有重组报告质粒的猪成纤维细胞,检测ssc-miR-148a和DNA甲基化转移酶1(DNMT1)的表达,及其对启动子活性的影响.结果显示,克隆得到的ssc-miR-148a启动子区2 043 bp片段具有启动子活性,该序列存在5个CpG岛、Sp1及AP2等转录因子结合位点.0、5和10 ng· mL-1浓度bFGF处理猪成纤维细胞和转染重组报告质粒的猪成纤维细胞后,ssc-miR-148a表达均显著下降(P＜0.05),DNMT1 mRNA显著增加(P＜0.05).启动子活性均显著下降(P＜0.05),5和10 ng· mL-1浓度间无显著差异(P＞0.05).结果表明,ssc-miR-148a启动子位于前体上游2 043 bp片段内,启动子区域有转录因子SP1结合位点,其表达受bFGF的调控.