家蝇肽聚糖识别蛋白（PGRP-SA）的克隆表达及细菌结合研究

• 作者: 修江帆 吴建伟 尚小丽 彭建 王宇 王涛 罗嫚 胡亚
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 家蝇 先天免疫 肽聚糖识别蛋白 原核表达 微生物结合实验
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 145-151
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.08.022

摘要

对家蝇 PGRP-SA 基因进行克隆表达以及研究其重组蛋白与细菌结合能力。从构建的家蝇（Musca domestica）幼虫cDNA 质粒文库中筛选到 PGRP-SA 基因，以 cDNA 质粒为模板设计引物，通过 PCR 扩增，获得 PGRP-SA 基因完整编码序列。运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行预测和分析。构建 pET-28a（+）-PGRP-SA 重组质粒，转化到大肠杆菌 BL21（DE3）中进行诱导表达及蛋白纯化。利用半定量 RT-PCR 检测 PGRP-SA 在家蝇3龄幼虫不同组织中的表达量差异。PGRP-SA 重组蛋白进行微生物结合实验。结果表明，PGRP-SA 基因 ORF 全长615 bp，编码204个氨基酸，理论分子量22.8 kD，等电点9.11，具有保守的 PGRP 结构域。成功构建了 pET-28a（+）-PGRP-SA 重组质粒，蛋白经 IPTG 诱导后在大肠杆菌中获得表达，经亲和层析柱纯化获得目的蛋白，利用 Western blot 检测证明纯化蛋白与预期大小相符。PGRP-SA 在家蝇3龄幼虫血淋巴、脂肪体、前肠、中肠、气管、马氏管都有表达，血淋巴组织中表达量最高，后肠无表达，由此说明 PGRP-SA 基因的表达具有一定的组织性。PGRP-SA 重组蛋白能与金黄色葡萄球菌和大肠杆菌结合，与白色念珠菌不能结合。成功表达及纯化家蝇 PGRP-SA 蛋白，证实家蝇 PGRP-SA能与金黄色葡萄球菌和大肠杆菌结合。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	修江帆	贵州医科大学寄生虫学教研室	13	32	4.0	5.0
2	王宇	贵州医科大学寄生虫学教研室	13	28	4.0	5.0
4	尚小丽	贵州医科大学寄生虫学教研室	8	16	3.0	4.0
7	王涛	贵州医科大学寄生虫学教研室	14	17	2.0	4.0
8	彭建	贵州医科大学寄生虫学教研室	4	9	2.0	3.0
9	胡亚	贵州医科大学寄生虫学教研室	4	17	3.0	4.0
10	罗嫚	贵州医科大学寄生虫学教研室	1	5	1.0	1.0