周期素依赖性蛋白激酶5过度活性与肾小球足细胞凋亡的关系研究

• 作者: 保莉 张彬 张霞 曹丽 李博 毕逢辰 罗红艳 郑亚莉 鄂静 陆晓华
• 来源期刊: 中国全科医学
• 关键词: 足细胞 细胞周期蛋白依赖激酶 5 p35 p25 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2016,（23）
• 所属期刊栏目: 论 著 Original Research
• 页码范围: 2793-2797
• 页数: 5页
• 分类号: R322.61
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/J.issn.1007-9572.2016.23.011

摘要

目的：通过在肾小球足细胞中转染 p25基因，探讨周期素依赖性蛋白激酶5（Cdk5）的活性对足细胞结构及功能的影响。方法2014年度，于含10%胎牛血清的 RPMI 1640培养液中培养分化成熟的小鼠离体足细胞，将足细胞分为对照组、空转染组和 p25转染组。应用 pAdTrack-CMV 病毒载体克隆 p25基因，并转染足细胞，48 h 收集细胞；采用 Western blotting 法测定 Cdk5、p25、p35及细胞凋亡相关蛋白 Cleaved caspase3的表达水平；应用免疫沉淀和同位素γ-32 P 标记法测定 Cdk5活性；足细胞免疫荧光化学染色，观察 Cdk5、p35在足细胞中的表达，以及足细胞 Actin的排列情况。结果 HEK293细胞 Cdk5表达阳性，p35表达阴性，肾脏皮质、足细胞和肾小球中均有不同程度的 Cdk5和 p35的表达。对照组和空转染组 p25表达阴性，p25转染组 p25表达阳性。各组细胞凋亡相关蛋白 Cleaved caspase3表达水平和 Cdk5活性比较，差异有统计学意义（P <0.05）；其中 p25转染组细胞凋亡相关蛋白 Cleaved caspase3表达水平和 Cdk5活性高于对照组和空转染组（P <0.05）。p25转染组足细胞内 Actin 排列紊乱，细胞形态发生异常改变，对照组和空转染组细胞内 Actin 排列正常，细胞形态没有发生改变。结论 p25引起 Cdk5过度活性可致肾小球足细胞形态改变，Actin 排列紊乱，诱发细胞凋亡。因此，Cdk5的活性在维持足细胞正常结构和功能方面发挥重要作用。