一种新型ATP－依赖型ClpP家族蛋白水解酶PlclpP基因的克隆、表达和酶学特性

• 作者: 李云霞 龚丽
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: ClpP家族蛋白水解酶 类芽孢杆菌 基因 克隆 表达 酶学特性
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 47-50
• 页数: 4页
• 分类号: Q789
• 字数: 430字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2016.05.012

摘要

运用基因克隆技术，以分离鉴定获得的蛋白水解酶高活性类芽孢杆菌（Paenibacillus lautus）CHN26菌株的基因组DNA为模板，经克隆鉴定该菌株是一种新型ATP－依赖型ClpP家族蛋白水解酶PlclpP基因，全长585 bp，编码194个氨基酸，分子量约为21 ku。采用大肠杆菌（Eschericia coli）pET表达系统构建PlclpP基因表达质粒pET－28－PlclpP，并在大肠杆菌BL21中实现了重组 PlClpP 蛋白的表达。利用组氨酸标签（His －tag）亲和纯化法获得PlClpP 纯化蛋白，发现PlClpP可能与宿主菌未知伴侣分子形成蛋白复合物。PlClpP复合物具有ATP－依赖型酪蛋白水解酶活性，最适反应温度为40℃、pH值7．0。表面活性剂强烈抑制PlClpP复合物的酶活性，而常规丝氨酸蛋白酶抑制剂对其活性没有抑制作用。本研究结果为蛋白酶新基因资源的开发、ClpP家族蛋白酶的基础理论和应用研究奠定了基础。