OGT多克隆抗体的制备及特异性分析

• 作者: 于文功 修玉宗 张瑜 张迪 陈丹阳 陈博雅 顾玉超
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: OGT 多克隆抗体 ELISA Western blotting
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 414-418
• 分类号: Q78|R-33
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2016.03.003

摘要

目的:为了探讨O-GlcNAc糖基转移酶OGT的生理和病理作用,需制备能高效特异性检测OGT的抗体.方法:在NCBI数据库中,查找人源OGT基因序列,根据OGT的结构特点,选取OGT的C末端催化结构域中的一段多肽序列(464-949位点氨基酸)做抗原.首先,构建OGT的C末端催化结构域(464-949位点氨基酸)的重组表达载体pET30-a-OGT-C,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达融合His标签的OGT-C蛋白,Ni+珠亲和层析法纯化提取OGT-C蛋白.再以OGT-C重组蛋白作为抗原,免疫Wistar大鼠制备多克隆抗体,并用间接ELISA法检测OGT抗体的效价,Western blotting鉴定抗体特异性.结果:多抗效价达1∶80000;在免疫印迹实验中,此多抗可以高效的检测重组抗原,并可以特异性识别培养细胞内源表达的ncOGT和mOGT这2种OGT亚型.结论:实验结果表明,获得高效价、高特异性的OGT多克隆抗体,在OGT的生物学研究中可以用于检测ncOGT和mOGT的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于文功	中国海洋大学医药学院	64	501	12.0	20.0
2	张瑜	中国海洋大学医药学院	15	74	4.0	8.0
3	顾玉超	中国海洋大学医药学院	16	25	3.0	4.0
4	张迪	中国海洋大学医药学院	12	38	3.0	6.0
5	陈丹阳	中国海洋大学医药学院	1	2	1.0	1.0
6	陈博雅	中国海洋大学医药学院	1	2	1.0	1.0
7	修玉宗	中国海洋大学医药学院	1	2	1.0	1.0