PR8F/NS1不同位点突变株对小鼠致病性的比较研究

• 作者: 刘云霞 崔卓栋 张萍 朱羿龙 李一权 柴丹 温树波 田明尧 解长占
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: H1N1亚型流感病毒 定点突变 NS1蛋白 实时荧光定量PCR 致病性
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 流感研究专题论著
• 页码范围: 6-12
• 页数: 7页
• 分类号: R373.1+3
• 语种: 中文

摘要

为了探索NS1不同位点突变对流感病毒毒力的影响以及NS1毒力相关位点的作用机制.分析流感病毒NS1蛋白的毒力相关关键基因区段和关键位点,以实验室保存的H1N1亚型流感病毒PR8F为模板,对其NS1基因的第42、81、149位氨基酸分别进行定点突变.利用反向遗传操作技术,成功拯救出突变毒株PR8F-42、PR8F-81、PR8F-149.将获救病毒接种SPF鸡胚,连续传代5代,至病毒能够稳定扩增后,通过血凝效价分析病毒复制效率.并将获救病毒与PR8F均以106 TCID50/100μL感染BALB/c小鼠,观察各组小鼠临床表现、体重变化及存活率.剖检攻毒后死亡小鼠,观察病理特征,制作肺组织病理切片.并提取小鼠肺脏RNA,通过qPCR检测各组小鼠肺脏的病毒载量.结果表明,PR8F的NS1蛋白第42位氨基酸由丝氨酸(Ser)改变为脯氨酸(Pro)对小鼠的致病性无明显改变.第81位、149位氨基酸突变则都能减弱突变株对小鼠的致病性,进而为研究NS1毒力相关位点的作用机制提供平台.