稳定表达流感病毒PR8株NS1蛋白MDCK细胞系的建立

• 作者: 周洁文 姬希文 张旭 徐大伟 戴晓光 李泽君 滕巧泱 王洪斌 闫丽萍 颜丕熙 高利
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 流感病毒 NS1基因 MDCK
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 8-12
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 3490字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-6422.2011.02.003

摘要

根据流感病毒A/Puerto Rico/8/34株NS1基因的核苷酸序列设计引物,PCR扩增后,将NS1完整开放阅读框分别克隆于pMX载体和PET30a载体,成功构建了pMX-PR8-NS1和PET-PR8-NS1重组质粒。将PET-PR8-NS1重组质粒转化Jm109感受态大肠杆菌,诱导表达获得重组NS1蛋白免疫小鼠制备多抗血清。同时,将逆转录病毒载体系统pMX-PR8-NS1、pCI-NF-KB、PMDSV和MDSV共转染293T细胞,制备逆转录病毒样粒子。将逆转录病毒样粒子感染MDCK细胞,利用嘌呤霉素进行抗性筛选。然后经过PCR、RT-PCR、间接免疫荧光鉴定,获得稳定表达PR8病毒NS1蛋白的细胞系,将之命名为MDCK-PR8-NS1细胞系。该细胞系的建立有望为深入开展流感病毒NS蛋白生物学功能的研究以及为扩增NS1基因删除的流感病毒提供了有利的工具。