以乙肝病毒核心蛋白为载体制备肠道病毒71型非结构蛋白3D单克隆抗体

• 作者: 刘东晓 吴坤 夏宁邵 巫洋涛 徐龙发 朱瑞 李永超 程通 赵欢
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乙肝病毒核心蛋白 肠道病毒71型 非结构蛋白3D 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 1341-1345
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3949字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2017.09.013

摘要

目的:预测肠道病毒71型(EV71)非结构蛋白3D的表位,以HBc蛋白为载体展示多肽,制备并鉴定抗EV71-3D的特异性单克隆抗体(mAb).方法:应用生物信息学方法分析预测出EV71 3D蛋白亲水性和免疫原性指数较高的多肽片段,并运用HBc颗粒型蛋白载体展示肽段,构建多肽融合蛋白,免疫BALB/c雌鼠,通过杂交瘤技术和亲和层析技术制备和纯化抗EV71-3D蛋白的特异性mAb,用间接ELISA、ELISPOT、IFA和IHC对mAb的性质进行初步鉴定.结果:构建表达分别嵌合3D蛋白34～43位氨基酸残基、 61～76位氨基酸残基、151～164位氨基酸残基的HBc重组蛋白,免疫并经过多轮克隆化筛选,获得抗EV71-3D单克隆抗体3E1,其亚类为IgG2a;免疫荧光试验、ELISPOT法和免疫组织化学染色结果显示其可与EV71特异性结合.结论:成功制备可特异性识别EV71的单克隆抗体3E1,为病毒的检测及进一步研究3D蛋白的功能奠定了基础,同时还验证了生物信息学技术与HBc颗粒型载体展示多肽技术相结合可快速高效地制备单克隆抗体.