金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B的表达及活性鉴定

• 作者: 丁晨 姚月婷 寸韡 张辉 李智华 李育中 毕研伟 肖红剑 闫玲梅 龙琼
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 丝氨酸类蛋白酶B 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 分泌表达 亲和层析
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 750-755
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4172字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2017.06.006

摘要

目的:以金黄色葡萄球菌基因组DNA为基础,在枯草芽孢杆菌中得到具有剪切功能的金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B.方法:以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,PCR扩增得到SplB基因,同源重组到表达载体pHTS-HIS上,再转化枯草芽孢杆菌;优化诱导条件发酵枯草芽孢杆菌,离心后超滤浓缩上清液,再经镍柱分离纯化;利用SDS-PAGE、Lowry法对蛋白的相对分子质量、浓度等进行分析,对蛋白的酶切活性进行鉴定.结果:金黄色葡萄球菌基因组DNA经PCR扩增得到与预计大小相符的DNA片段,通过同源重组构建了表达载体pHTS-SplB-His;选取诱导前菌液D.nm为2.0、IPTG浓度为0.5 mmol/L、诱导4h的最优条件发酵枯草芽孢杆菌,表达大量金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B;蛋白浓缩后,经镍柱分离纯化得到纯度较高且具有剪切功能的金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B.结论:采用枯草芽孢杆菌进行发酵表达,可提高金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B的表达量,并且能够得到具有剪切功能的蛋白.本研究可为外源蛋白在枯草芽孢杆菌中的发酵技术提供重要参考.