雷公藤4α-甲基氧化酶基因(TwSMO1)的cDNA全长克隆及表达分析

• 作者: 关红雨 张夏楠 张逸风 童宇茹 胡添源 苏平 赵瑜君 高伟 黄璐琦
• 来源期刊: 中国现代中药
• 关键词: 雷公藤 4α-甲基氧化酶 克隆 生物信息学分析 诱导表达
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 753-757,763
• 页数: 6页
• 字数: 3400字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13313/j.issn.1673-4890.2017.6.004

摘要

目的:克隆得到雷公藤一型4α-甲基氧化酶(TwSMO1)(GenBank KX987126)全长基因,并对其进行序列分析及初步的功能验证.方法:根据雷公藤转录组数据,利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到雷公藤4α-甲基氧化酶基因(TwSMO1),并利用相关软件对所得核酸序列及其所编码的氨基酸序列进行生物信息学分析.用茉莉酸甲酯(MeJA)诱导雷公藤悬浮细胞,用实时荧光定量(RT-PCR)的方法分析诱导不同时间点后雷公藤悬浮细胞中的TwSMO1基因的相对表达量.结果:克隆所得的TwSMO1基因cDNA全长1505 bp,开放阅读框900 bp,编码299个氨基酸,在线预测其所编码蛋白分子量为34.55 kDa,理论等电点为6.89.多重序列比对结果显示其与其他物种的SMO1氨基酸序列有较高同源性,且包含SMO1基因家族的3个保守域,系统进化树将其归为4α-甲基氧化酶第一家族基因,遂将其命名为TwSMO1.RT-PCR结果表明MeJA诱导后TwSMO1基因在1 h后表达量达到最高,约是对照组的450倍.结论:本研究首次克隆得到雷公藤TwSMO1基因,并对其进行生物信息学分析及MeJA诱导表达分析,为深入研究此基因功能及阐述雷公藤甾醇生物合成途径奠定基础.