Arg188Gln(G/A)突变对犬尿氨酸酶活性的影响

• 作者: 姬开达 朱鼎良 沈杰 陈闻东 高平进
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 犬尿氨酸/分析 犬尿氨酸3-单加氧酶/分析 基因 突变 高血压/病因学 载体蛋白质类
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 原著
• 页码范围: 643-648
• 页数: 6页
• 分类号: R394.3|R34
• 字数: 3932字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2017.12.11

摘要

目的:验证犬尿氨酸酶(KYNU)Arg188Gln(G/A)突变能否改变KYNU的活性.方法:抽提人肝脏细胞的总RNA,通过RT-PCR法获得KYNU基因全长cDNA,以KYNU 基因 Arg188Gln 位点附近序列为模板设计定点突变引物,完成Arg188Gln(G/A)的定点突变,将突变型和野生型KYNU基因克隆到pcDNA载体质粒中,获得野生型和突变型pcDNA-KYNU重组表达质粒,经酶切鉴定和测序验证后转染HEK293细胞,蛋白质印迹法检测KYNU在细胞中的表达,用高效液相色谱法检测HEK293细胞的KYNU活性.结果:野生型和突变型pcDNA-KYNU重组质粒在 HEK293细胞中均能表达有活性的 KYNU,KYNU 的米氏常数分别为(9.833 ± 0.513)μmol/L 和(29.900 ± 0.265)μmol/L,最大酶促反应速率分别为(0.700 ± 0.096)nmol·mg-1·min-1和(0.084 ± 0.003)nmol·mg-1·min-1,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论:Arg188Gln(G/A)突变可以减弱KYNU的活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱鼎良	上海交通大学医学院附属瑞金医院上海市高血压研究所	52	232	9.0	14.0
2	高平进	上海交通大学医学院附属瑞金医院上海市高血压研究所	56	124	6.0	9.0
3	沈杰	浙江大学医学院附属儿童医院滨江院区心血管内科	44	340	9.0	17.0
4	陈闻东	上海交通大学医学院附属瑞金医院上海市高血压研究所	3	5	1.0	2.0
5	姬开达	上海交通大学医学院附属瑞金医院上海市高血压研究所	3	9	1.0	3.0