Parkin介导的线粒体自噬在高糖高脂导致的心肌细胞损伤中的保护作用

• 作者: 余文军 张国勇 张英梅 林晨 王婷婷 高蓓蕾 黎翔
• 来源期刊: 心脏杂志
• 学科: 医学
• 关键词: E3泛素化连接酶 线粒体自噬 糖尿痛心肌病
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 382-388
• 页数: 7页
• 分类号: R392.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13191/j.chj.2017.0099

摘要

目的 明确Parkin(一种E3泛素化连接酶)介导的线粒体自噬对高糖高脂导致的原代心肌细胞损伤的保护作用.方法 以LV-lacZ(LacZ空病毒)或LV-Parkin(Parkin过表达慢病毒)转染SD大鼠原代心肌细胞48 h,再用含葡萄糖(5.5 mmol/L NG)的培养基或含棕榈酸盐(500μmol/L HF)和葡萄糖(25 mmol/L HG)的高糖高脂培养基培养心肌细胞24 h.实验分组:①阴性对照组(NG-LacZ),②正常Parkin过表达组(NG-Parkin),③高糖高脂阴性对照组(HG-HF-LacZ),④高糖高脂Parkin过表达组(HG-HF-Parkin).用Western blot法检测PTEN介导的假定激酶蛋白1(PINK1)、Parkin、P62(一种自噬相关蛋白)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白表达水平.采用JC-1染色法检测活细胞内线粒体膜电位水平.免疫荧光法检测自噬体数量,TUNEL法检测细胞凋亡率.结果 与对照组相比,高糖高脂处理的原代心肌细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ,P62表达水平上调(P＜0.05),PINK1表达未发生统计学差异,Parkin表达水平下调(P＜0.05),自噬体数量增多,线粒体膜电位下降功能损伤,心肌细胞凋亡率升高(P＜0.05).而用高糖高脂处理LV-Parkin转染的心肌细胞,LC3-Ⅱ蛋白表达水平进一步升高(P＜0.05),而P62表达水平显著下降(P＜0.05),自噬体数量进一步增多,细胞内线粒体膜电位水平上升,心肌细胞凋亡率下降(P＜0.05).结论 高糖高脂可引起SD大鼠原代心肌细胞自噬流量降低,自噬小体增多,线粒体自噬发生障碍.Parkin过表达慢病毒通过激活心肌细胞内线粒体自噬途径,提高自噬流量,改善线粒体功能,降低心肌细胞凋亡率.