Apidaecin型抗菌肽在毕赤酵母菌中的基因工程表达

• 作者: 周建业 张小凤 施文 易根云 李志强 陈莉娅 马媛媛 马瑞 黄慧敏
• 来源期刊: 口腔医学研究
• 学科: 医学
• 关键词: 抗菌肽 Apidaecin 毕赤酵母菌
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究论著
• 页码范围: 471-474
• 页数: 4页
• 分类号: R780.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13701/j.cnki.kqyxyj.2017.05.002

摘要

目的;利用基因工程的方法,在毕赤酵母菌(Pichia patoris,P.pastoris)中成功表达Apidaecin型抗菌肽.方法:利用PCR技术在Apidaecin基因N端插入EcoR I酶切位点、GST标签(并连接DDDDK肠激酶位点),且在C端插入终止密码子和Not I酶切位点,后将上述片段扩增后与表达载体pPICZαA连接,构建重组表达载体pPICZαA GST-Apidaecin,并测序鉴定;将pPICZαA-GST-Apidaecin重组质粒电转至P.pastoris X33中并进行发酵表达;表达产物经GST亲和层析纯化后进行SDS-PAGE凝胶电泳鉴定,EK肠激酶切除GST标签后进行抑菌实验.结果:SDS-PAGE凝胶电泳结果显示GST-Apidaecin融合蛋白表达的产物条带位于分子量约为.28KD处,与理论分子量一致;抑菌实验表明,用EK肠激酶切除GST融合标签后,Apidaecin型抗菌肽对大肠杆菌有明显的抑菌活性.结论:Apidaecin型抗菌肽在P.pastoris菌中得到成功表达并具有抑菌活性.