小球藻亲环蛋白A的酶活性及过表达拟南芥抗盐性分析

• 作者: 何明良 廖栩 张素艳 王旭辉 管清杰 罗秋香 马海燕
• 来源期刊: 植物研究
• 学科: 生物学
• 关键词: 噬碳酸盐小球藻 盐碱地 亲环蛋白A 肽脯氨酰顺反异构酶 原核表达蛋白
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 722-729
• 页数: 8页
• 分类号: Q812
• 字数: 5817字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7525/j.issn.1673-5102.2017.05.012

摘要

在前期研究中分离到噬碳酸盐小球藻(Chlorella sp.X1)的亲环蛋白基因CsCyp1A(登录号:KY207381),编码CsCyp1A蛋白是否具有肽酰脯氨酰顺反异构酶(PPIase)活性功能是进一步研究它参与小球藻耐盐生物学过程的基础.通过His标签的pQE-30-CsCyp1A原核蛋白表达载体,经IPTG诱导它的E.coli M15菌株表达融合蛋白,Nitra-柱纯化后获得纯化的30 kDa左右的His-CsCyp1A融合蛋白质,Western杂交检测到HisCsCyp1A蛋白的杂交信号.酶活性分析显示,HisCsCyp1A融合蛋白中生色基团的产生速度明显快于对照,表明CsCyp1A蛋白可以催化底物N-succinyl-Xaa-Pro-Phe-p-nitroanilide中Xaa-Pro肽键的顺反折叠,说明纯化的CsCyp1A蛋白具有PPIase活性.典型的亲环蛋白家族成员具有肽酰脯氨酰顺反异构酶(PPIase)活性,参与折叠和转运、信号转导、免疫调节、细胞凋亡等生物学过程.真空渗入法侵染转化的拟南芥在35S启动子驱动下超表达CsCyp1A基因,耐盐性研究表明它提高了过表达株系对NaC1胁迫的耐性,揭示小球藻CsCyp1A基因的抗盐性功能,它将成为抗逆育种的基因资源.本研究也为探索小球藻亲环蛋白A的抗盐碱胁迫生物学作用和分子育种奠定了基础.