田菁根瘤菌嗜盐α-淀粉酶的基因克隆表达与分子改造

• 作者: 姚甜甜 杜丽琴 杨媛 熊海涛 韦宇拓
• 来源期刊: 广西科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 克隆表达 嗜盐机理 α-淀粉酶 定点突变 离子结合位点
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 生物科学
• 页码范围: 201-205
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3461字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13656/j.cnki.gxkx.20170119.005

摘要

[目的]克隆表达田菁根瘤菌嗜盐α-淀粉酶基因,并对其进行基因改造,为探索与嗜盐性相关的氨基酸位点提供参考.[方法]从田菁根瘤菌及周围土壤的宏基因组中克隆到一个命名为RSA的极端嗜盐淀粉酶.通过与同源性为75.33%的嗜盐α-淀粉酶K6的序列比对发现,RSA-D205位点与已报道的K6-N204(嗜盐相关的氨基酸位点)相似,从而对其进行定点饱和突变以研究相关酶学性质.[结果]共获得17个突变子,其最适NaCl浓度较RSA均有不同程度的降低.RSA-D205R、RSA-D205C酶反应温度高达80℃,拓宽了其应用范围.[结论]RSA-D205氨基酸残基位点与Na+结合位点有一定的联系;另外,精氨酸(R)、半胱氨酸(C)对淀粉酶的高温改造具有参考价值.