大肠杆菌嗜盐α-淀粉酶基因的分子改造及其酶学特性

• 作者: 吴昊 李剑龙 杨媛 汤宏赤 韦宇拓
• 来源期刊: 广西科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 非嗜盐菌 嗜盐淀粉酶 同源建模 定点突变
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 分子生物学
• 页码范围: 25-30
• 页数: 6页
• 分类号: Q93
• 字数: 4156字
• 语种: 中文

摘要

[目的]对大肠杆菌Escherichia coli嗜盐α-淀粉酶基因进行改造,并探索嗜盐a-淀粉酶的嗜盐特性.[方法]从非嗜盐的大肠杆菌JMl09中克隆到一个嗜盐α-淀粉酶基因k6并进行重组表达.通过同源建模,确定Na+结合位点上的氨基酸残基,并对相应位点进行定点突变.最后对突变酶的酶学性质进行研究.[结果]相对于野生酶,突变酶更加嗜盐,其最适NaC1浓度由2 mol/L增加到3 mol/L,最适pH值为7,最适温度为50℃,酶活力为4 831 U/mg,提高近4倍.经HPLC检测,突变酶与2％(W/V)可溶性淀粉反应后的产物为葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖的混合物.[结论]嗜盐α-淀粉酶基因k6的嗜盐特性与Na+结合位点具有直接联系.