山羊副流感病毒3型N蛋白原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

• 作者: 张纹纹 李文良 杨蕾蕾 毛立 江杰元 王咪 郝飞
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 山羊副流感病毒3型 N蛋白 原核表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 150-156
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 5256字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2017.01.018

摘要

山羊副流感病毒3型可引起山羊呼吸道疾病,与支原体、细菌等混合感染引起广泛的发病与死亡,笔者拟通过建立基于N蛋白的间接ELISA抗体检测方法用于该病的监测.设计引物扩增目的基因N,克隆到质粒pET32a(+)上,构建重组质粒pET32a-N,并转化至大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达重组N蛋白并鉴定.通过条件优化建立ELISA抗体检测方法,并检测临床样品与HI试验进行比较.本试验成功构建重组质粒,诱导表达的蛋白质(47 ku)经SDS PAGE与Western blot鉴定,证明其正确表达且具有良好的抗原性与特异性.利用纯化的蛋白质作为包被抗原优化间接ELISA反应条件,确定其最佳抗原包被浓度为1μg·mL-1、血清稀释度为1:200、血清作用时间60 min、酶标二抗工作浓度为1:6 000、二抗反应时间30 min、底物显色时间10 min.通过对138份临床血清样品检测发现其与HI试验结果符合率达88.41％.本研究建立的间接ELISA检测方法敏感、特异、准确,适用于临床样品的检测与血清流行病学调查.