'云香'水仙ACC合成酶基因NtACS 1的克隆及遗传转化

• 作者: 孙申申 李梦思 李欢 李科 杨菲颖 温秀萍 陈晓静
• 来源期刊: 西北植物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: '云香'水仙 基因克隆 表达分析 延长花期 ACS
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 250-257
• 页数: 8页
• 分类号: Q785|Q786
• 字数: 6077字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7606/j.issn.1000-4025.2017.02.0250

摘要

为探究多花水仙ACS基因的序列特征及功能,以'云香'水仙盛花期花瓣为试验材料,根据'云香'水仙花朵转录组数据信息,通过RT-PCR方法克隆出1个ACS基因,命名为NtACS 1(GenBank KX082936);NtACS 1开放阅读框(ORF)长度为552 bp,编码183个氨基酸.编码蛋白质分子量约为20.6 KDa,理论等电点为6.30,不稳定系数为65.49,属于不稳定的疏水性蛋白.通过qRT-PCR对'云香'水仙不同时期花瓣和副冠中的NtACS 1基因进行了表达分析,得到与'云香'水仙花朵转录组数据中相同的结果:NtACS 1基因在'云香'水仙花瓣和副冠中的表达都是随着花衰老过程呈现逐渐下降的趋势,且NtACS 1基因在花瓣和副冠中的表达峰值都在花苞期,表明NtACS 1基因编码的蛋白是在乙烯生物合成途径的系统1发挥催化作用的ACC合成酶.成功构建了NtACS 1基因的正义植物表达载体,并通过农杆菌介导法获得8株转基因烟草,PCR和RT-PCR检测显示其中有6株为阳性植株,初步证实NtACS 1基因已导入烟草基因组中且在烟草中已表达.该研究结果为进一步分析NtACS 1基因的功能和后续转化水仙延长其花期研究奠定了基础.