用重叠PCR策略构建抑制NF-κB活性的IKBA基因突变体

• 作者: 党喜同 李雪 毛亮 黄文俊 黄鹂
• 来源期刊: 西南医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 重叠PCR IKBA 点突变 NF-κB
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学与实验研究
• 页码范围: 236-239
• 页数: 4页
• 分类号: R784
• 字数: 2188字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2096-3351.2017.03.003

摘要

目的:用重叠PCR方法将IKBA基因三个碱基进行点突变A94G、G95C、T106G.方法:根据重叠PCR原理设计IKBA基因两条末端引物及A94G、G95C、T106G突变引物,从HUVEC细胞克隆IKBA基因,将其作为模板进行第一次PCR,将第一次PCR产物稀释10000~50000倍后作为模板,扩增突变体IKBAm,并克隆到pLVX-IRES-ZsGreen载体,用双酶切及DNA测序筛选阳性质粒.结果:从HUVEC细胞克隆的IKBA基因及其突变体IKBAm基因长度均为954 bp,编码317个氨基酸,与IKBA基因相比,突变体IKBAm基因3个位点发生突变94A→G,95G→C,106T→G,编码的32/36位氨基酸由Ser突变为Ala.结论:成功克隆人IKBA基因及其32/36 Ser→Ala突变体IKBAm.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	毛亮	西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室	2	5	1.0	2.0
2	李雪	西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室	11	7	2.0	2.0
3	黄文俊	西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室	2	0	0.0	0.0
4	黄鹂	西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室	1	0	0.0	0.0
5	党喜同	西南医科大学心血管医学研究所医学电生理学教育部重点实验室	1	0	0.0	0.0